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低溫電轉(zhuǎn)儀的工作原理核心是利用低溫環(huán)境保護(hù)細(xì)胞活性，同時通過高壓脈沖電場在細(xì)胞膜上形成可逆孔道，使外源核酸（如DNA、RNA）進(jìn)入細(xì)胞，實現(xiàn)高效轉(zhuǎn)化。1.核心機(jī)制：電穿孔效應(yīng)這是電轉(zhuǎn)儀的基礎(chǔ)工作原理，分為三個關(guān)鍵步驟：電場施加：儀器向含有細(xì)胞和外源核酸的電轉(zhuǎn)杯施加短時、高壓的脈沖電場。電場強(qiáng)度通常在1-30kV/cm，脈沖時間從微秒到毫秒級不等，具體參數(shù)需根據(jù)細(xì)胞類型調(diào)整。細(xì)胞膜穿孔：高壓電場會破壞細(xì)胞膜的磷脂雙分子層結(jié)構(gòu)，使其產(chǎn)生瞬時、可逆的微孔（即“電穿孔”）。這些微孔的...

在精密儀器、醫(yī)療設(shè)備及半導(dǎo)體制造等領(lǐng)域，TEC溫控板因其精準(zhǔn)的溫度控制能力被廣泛應(yīng)用。然而，長期高負(fù)荷運行下難免出現(xiàn)各類故障，影響系統(tǒng)穩(wěn)定性和設(shè)備壽命。本文將針對過載保護(hù)觸發(fā)、傳感器失效等典型問題提供系統(tǒng)性排查方法與解決方案，助力工程師快速恢復(fù)設(shè)備正常運行。一、過載保護(hù)機(jī)制解析與應(yīng)對策略當(dāng)電流超過額定值時，TEC溫控板內(nèi)置的保護(hù)電路會主動切斷電源以防止器件損壞。此時LED顯示屏通常顯示“OL”或“PROT”報警代碼。首先應(yīng)檢查負(fù)載端是否存在短路現(xiàn)象——使用萬用表逐段測量導(dǎo)線電...

細(xì)胞外囊泡是一組參與細(xì)胞間通訊的異質(zhì)膜結(jié)合囊泡，在質(zhì)膜（外泌體）或通過內(nèi)吞作用（外泌體）形成。迄今為止，大多數(shù)外泌體研究都集中在體外系統(tǒng)或源自體液的外泌體上，而組織源性的外泌體仍未得到充分探索。在這里，我們提出了一種使用細(xì)胞類型特異性啟動子驅(qū)動的報告基因構(gòu)建體的方案，用于靶向標(biāo)記和隨后從小鼠組織體內(nèi)特定細(xì)胞類型中分離外泌體。由于目前主要基于大小、密度或表面標(biāo)記的分離技術(shù)的局限性，外泌體和外泌體之間的區(qū)分仍然具有挑戰(zhàn)性。為了解決這個問題，我們的方法利用基因工程來特異性標(biāo)記外泌體...

當(dāng)實驗室里的體外電轉(zhuǎn)儀突然亮起警示燈或無法正常工作時，許多科研人員的第一反應(yīng)可能是聯(lián)系廠商維修。但其實大部分常見故障都可以通過基礎(chǔ)排查和簡單操作自行解決。掌握這些技能不僅能節(jié)省時間成本，更能避免因設(shè)備停機(jī)影響實驗進(jìn)度。以下是針對該設(shè)備典型問題的系統(tǒng)性解決方案。電源問題是引發(fā)故障的常見原因之一。若體外電轉(zhuǎn)儀無響應(yīng)，首先要檢查插座是否通電，可嘗試更換其他電器驗證電源接口有效性。部分型號配備獨立保險絲裝置，位于機(jī)身背面或底部隱蔽位置，用十字螺絲刀小心打開保護(hù)蓋后即可查看。發(fā)現(xiàn)熔斷時...

在現(xiàn)代生命科學(xué)與生物技術(shù)領(lǐng)域，流式電轉(zhuǎn)染系統(tǒng)猶如一顆璀璨的明珠，散發(fā)著耀眼的光芒。它所涉及的技術(shù)原理和應(yīng)用場景，對于許多科研工作者以及相關(guān)領(lǐng)域的從業(yè)者來說，都有著至關(guān)重要的意義。流式電轉(zhuǎn)染系統(tǒng)的核心在于其巧妙地利用了電場的作用來實現(xiàn)細(xì)胞的轉(zhuǎn)染。當(dāng)細(xì)胞懸浮在特定的緩沖液中時，施加適當(dāng)?shù)碾妶雒}沖，會在細(xì)胞膜上形成微小的孔隙。這些孔隙就像是臨時開啟的“通道”，使得外源物質(zhì)，比如核酸分子等，能夠進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部。這一過程看似簡單，實則蘊(yùn)含著精密的科學(xué)設(shè)計。電場的強(qiáng)度、脈沖的時間和次數(shù)等參...

瘤內(nèi)免疫療法（ITIT）致力于通過直接刺激腫瘤中的免疫系統(tǒng)來逆轉(zhuǎn)局部腫瘤介導(dǎo)的免疫抑制，從而產(chǎn)生有效的抗腫瘤免疫。使用體內(nèi)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染作為瘤內(nèi)癌癥免疫療法的白細(xì)胞介素12（IL-12）的體內(nèi)表達(dá)進(jìn)入轉(zhuǎn)移性黑色素瘤的II期臨床試驗，但臨床成功率有限。我們試圖通過在編碼IL-12的質(zhì)粒治療中加入表達(dá)CD154（CD40配體）的質(zhì)粒來提高體內(nèi)IL-12電穿孔的療效，并評估對實體瘤的療效。患有皮內(nèi)B16F10黑色素瘤或MC38小鼠結(jié)腸癌腫瘤的小鼠每周接受2次瘤內(nèi)（IT）注射編碼IL-12...

突出第一次全面表征永生化T細(xì)胞系CTLL-2和HT-2。質(zhì)粒電穿孔可實現(xiàn)高效且具有成本效益的T細(xì)胞工程。用于T細(xì)胞電穿孔的優(yōu)化轉(zhuǎn)基因啟動子和質(zhì)粒結(jié)構(gòu)。多功能轉(zhuǎn)基因遞送策略簡化了T細(xì)胞工程工作流程。用于精確T細(xì)胞工程的高效CRISPR/Cas9基因組編輯工具包。摘要轉(zhuǎn)基因T細(xì)胞療法最近的臨床成功凸顯了加速T淋巴細(xì)胞基礎(chǔ)研究和功能篩選方法的迫切需要。然而，一種簡單且具有成本效益的T細(xì)胞高效基因工程方法仍然難以捉摸。目前的方法通常依賴于病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)，這是勞動密集型的，需要嚴(yán)格的生物安全...

突出轉(zhuǎn)基因允許將有益性狀（如抗蟲害和改善營養(yǎng)）引入作物，從而有助于滿足全球糧食需求并提高農(nóng)業(yè)復(fù)原力。農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化和生物列表學(xué)等傳統(tǒng)方法面臨效率低、組織損傷和不可預(yù)測的基因整合等問題，這些問題限制了其有效性。納米顆粒通過克服植物細(xì)胞壁障礙來提高基因遞送效率和精度。將納米技術(shù)與CRISPR/Cas和組織培養(yǎng)方法相結(jié)合，可以顯著推進(jìn)植物基因工程。納米基因遞送可以靶向細(xì)胞核、葉綠體和線粒體基因組，而不會造成明顯的組織損傷，從而提高基因修飾的精度和有效性。摘要植物基因工程中的常規(guī)基...

體液免疫在建立和維持宿主-微生物群共生以及對病原微生物的免疫力中起著重要作用。然而，鑒定在屏障和全身組織內(nèi)引發(fā)適應(yīng)性免疫反應(yīng)的抗原是進(jìn)一步理解這種宿主-微生物對話的重大障礙。在這里，我們提供了一種方案，通過使用噬菌體（噬菌體）展示介導(dǎo)的抗體/抗原生物淘選來鑒定共生微生物和病原微生物表達(dá)的免疫原性蛋白抗原。該程序需要生成M13噬菌粒文庫，生產(chǎn)ORFeome（開放閱讀框總量）噬菌體文庫，然后進(jìn)行多輪基于親和力的免疫沉淀，隨后通過ELISA、ELISPOT和/或B細(xì)胞四聚體生成進(jìn)行...

在現(xiàn)代分子生物學(xué)的實驗室中，有一種看似平凡卻又至關(guān)重要的設(shè)備，它猶如一位默默耕耘的幕后英雄，在生命科學(xué)研究領(lǐng)域發(fā)揮著關(guān)鍵作用，這就是PCR儀。PCR儀，全稱為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)儀，它的工作原理基于一種能夠在短時間內(nèi)大量擴(kuò)增特定DNA的片段的技術(shù)——聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。這一過程就像是一場精準(zhǔn)的分子復(fù)制接力賽。首先，在高溫條件下，DNA雙鏈打開，如同解開一條復(fù)雜的繩索，使其分成兩條單鏈模板。接著，在適宜的溫度下，引物與模板DNA的特定序列相結(jié)合，這一步猶如為復(fù)制過程找到了精準(zhǔn)的起始點。然...

在生命科學(xué)的廣闊領(lǐng)域中，蛋白質(zhì)作為生命活動的基石，其結(jié)構(gòu)與功能的解析一直是科學(xué)家們追求的目標(biāo)之一。而要實現(xiàn)這一目標(biāo)，高精度蛋白晶體培養(yǎng)箱則扮演著至關(guān)重要的角色。這不僅僅是一臺設(shè)備，更是連接微觀世界與宏觀認(rèn)知的橋梁，為科學(xué)家們揭示生命的奧秘提供了可能。一、蛋白晶體培養(yǎng)的重要性蛋白質(zhì)是執(zhí)行生命活動的關(guān)鍵分子，從酶促反應(yīng)到信號傳導(dǎo)，從肌肉收縮到免疫系統(tǒng)的防御，無不離不開蛋白質(zhì)的參與。為了深入理解這些復(fù)雜的生命過程，科學(xué)家需要首先了解蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)。然而，直接觀察原子級別的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)是...

在現(xiàn)代科學(xué)研究與生物技術(shù)領(lǐng)域，低溫電轉(zhuǎn)儀扮演著較為關(guān)鍵的角色。它并非是那種一亮相便能吸引大眾目光的儀器設(shè)備，卻悄然在細(xì)胞研究、基因工程等諸多科研前沿陣地發(fā)揮著不可替代的作用。低溫電轉(zhuǎn)儀的工作原理，簡單來說，是利用電場的作用，促使細(xì)胞膜的通透性發(fā)生改變，從而讓外源物質(zhì)，比如核酸等大分子，能夠進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部。而低溫環(huán)境在其中有著的意義，它有助于維持細(xì)胞內(nèi)一些結(jié)構(gòu)與成分的穩(wěn)定性，減少因電轉(zhuǎn)過程中可能產(chǎn)生的熱效應(yīng)等對細(xì)胞造成的損傷，就如同給整個電轉(zhuǎn)過程營造了一個相對“溫和”的操作空間，...